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实验三 蛋白质的两性反应和等电点的测定

实验三蛋白质的两性反应和等电点的测定

一、目的和要求

1.了解蛋白质的两性解离性质。

2.初步学会测定蛋白质等电点的方法。

二、原理

蛋白质由许多氨基酸组成,虽然绝大多数的氨基与羧基成肽键结合,但是总有一定数量自由的氨基与羧基,以及酚基等酸碱基团,因此蛋白质和氨基酸一样时两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时,蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等,以兼性离子状态存在,在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动,也不向阳极移动,这时溶液的PH值称为该蛋白质的等电点(PI)。当溶液的PH低于蛋白质等电点时,即在氢离子较多的条件下,蛋白质分子带正电荷成为阳离子;当溶液的PH高于蛋白质等电点时,即在氢氧根离子较多的条件下,蛋白质分子带负电荷成为阴离子。

在等电点时蛋白质溶解度最小,容易沉淀析出。

三、试剂和器材

1.试剂

0.5%酪蛋白溶液;酪蛋白醋酸钠溶液;

0.04%溴甲酚绿指示剂;

0.02N盐酸;

0.1N醋酸溶液;

0.01N醋酸溶液;1N醋酸溶液;

0.02N氢氧化钠溶液

2.器材

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